如何接种琼脂平板
什么是琼脂平板？
琼脂平板是一种常见的实验室工具，用于生长和维持细菌、真菌或病毒培养物。琼脂平板由一个无菌培养皿组成，里面充满了一种营养丰富的凝胶状物质，称为琼脂，这种物质源自藻类。琼脂是微生物生长的理想培养基，因为它易于使用、熔点低且在室温下凝固。
就蘑菇而言，它们并不以琼脂本身为食，而是以琼脂中添加的营养物质和水分为食。添加到琼脂中的具体营养素取决于所种植蘑菇的类型，但通常包括葡萄糖、麦芽提取物和酵母提取物。琼脂平板为蘑菇生长和发育菌丝体提供无菌和受控的环境。
真菌学家经常使用琼脂平板作为分离和选择特定蘑菇菌株以进行进一步培养的手段。通过将孢子或组织样本接种到琼脂平板上，真菌学家可以观察和监测单个菌落的生长，选择最健康和最有活力的菌落，并将它们转移到新的琼脂平板或其他生长基质上。
所有从 Olympus Myco 购买的琼脂平板均已在商用高压锅中灭菌，以有效消除琼脂混合物中可能存在的任何潜在的活生物体或孢子。
接种琼脂平板
使用开放式琼脂板时，强烈建议使用流动罩或静气箱 (SAB)，以尽量减少空气污染的风险。这些工具可以降低空气中的颗粒和微生物干扰培养物生长的可能性，从而帮助提高实验的成功率。
- 用酒精或消毒液擦拭干净的工作表面。
- 将琼脂板从流动罩或 SAB 内的密封袋中取出。确保在流动罩或 SAB 内执行所有程序。
- 将板整齐地堆放，一次仅使用一个开放的板，以最大程度地减少污染风险。
- 打开板，然后添加孢子。
- 液体培养注射器：在将培养物添加到板中之前，请确保对针头进行消毒。将少量液体培养物（<1cc）添加到琼脂板的中心。盖上盖子，然后旋转盘子，将液体均匀地分布在表面上。
- 盖上盖子后，使用封口膜密封琼脂板。
- 在每个盘子上贴上蘑菇的菌株或种类、日期和任何其他相关信息。
- 在适合特定蘑菇菌株或物种的适当温度和条件下孵育平板。
培养琼脂平板
对于大多数物种，琼脂平板可以在室温下孵育。在琼脂平板上看到菌丝体生长所需的时间可能会有所不同，具体取决于多种因素，包括正在生长的真菌类型、培养环境的温度和湿度以及琼脂平板的寿命和状况。一般来说，大多数类型的真菌将在孵化后 3 至 7 天内开始出现明显的生长，但某些物种可能需要更长时间。定期监测平板并寻找任何污染迹象非常重要，例如霉菌或细菌生长，这可能会干扰菌丝体的生长。
琼脂到琼脂转移
当菌丝体定植到琼脂平板的大约 80-90% 时，您可以选择将培养物转移到其他琼脂平板上。如果您在平板上遇到污染的部分，您可以转移未受影响的部分以获得干净的培养物。根据污染程度，可能需要多次转移才能实现完全清洁的培养物。要将菌丝体从一个琼脂板转移到另一个琼脂板，请在流动罩或静气箱 (SAB) 内执行以下步骤：
- 对工具进行消毒：对用于琼脂间转移的所有工具进行消毒。将手术刀或镊子消毒直至红热，然后冷却后再切入琼脂。
- 选择健康的菌丝体菌落：从供体琼脂平板中选择健康、发育良好的菌丝体菌落。该菌落应该活跃生长并且没有任何可见的污染物。
- 切一小片菌丝体：使用无菌手术刀或镊子，从供体菌落边缘切下一小片菌丝体。小心不要接触琼脂表面的任何其他部分。
- 将菌丝体转移到新平板上：提起接收琼脂平板的盖子，并用手术刀或环在琼脂上做一个小切口。轻轻地将菌丝体碎片放在新平板上，确保其粘附在琼脂表面。盖上板的盖子，然后用封口膜密封板。
- 标记新板：在新板上标记菌株名称、日期和任何其他相关信息。这将帮助您跟踪文化及其发展。
- 孵育新平板：在适合特定蘑菇种类的温度和湿度条件下孵育新平板。定期检查板是否有生长和污染的迹象。